最新研究发现，颅骨骨髓（BM）与硬脑膜之间通过骨性通道存在直接连接，使脑脊液（CSF）能够到达颅骨BM。这种连接在功能上至关重要，因为颅骨BM是一个主要的淋巴器官，能够在稳态和神经炎症或损伤状况下向中枢神经系统（CNS）及CNS边界区域提供免疫细胞，包括发育中和未成熟的B细胞以及髓系细胞。最近的研究还表明，在人类胶质母细胞瘤患者和小鼠肿瘤模型中，颅骨BM中含有肿瘤特异性CD8 + T细胞和调节性T细胞。虽然BM是一个主要的淋巴器官，但在某些条件下也存在适应性免疫反应。成熟的抗原呈递细胞（APCs）、T细胞和B细胞迁移到BM，在那里，驻留的天真T细胞和B细胞可以遇到抗原并形成群集。尽管之前的研究表明BM能够支持适应性免疫反应，但颅骨BM在CNS抗原识别和免疫监控中的作用尚未得到阐明。在此，我们展示了小鼠的颅骨BM包含了外周淋巴器官特征的细胞成分。APCs、T细胞和B细胞形成类似生发中心（GC）结构的群集。这些颅骨淋巴结构在小鼠的稳态和脑癌条件下参与CNS的免疫监控。通过调整这些结构在体内的存在和活性，我们表明这些结构对抗肿瘤免疫有贡献。颅骨BM中T FH细胞的存在我们比较了小鼠颅骨BM与其他BM部位的T细胞表型，以表征颅骨BM的适应性免疫成分。CD4 +和CD8 + T细胞在总免疫细胞中的频率在BM各部位相似，在胸骨BM中频率较高，但整体上低于次要淋巴器官（SLOs）。天真T细胞和效应T细胞的频率也相似。然而，颅骨BM显示出与其他BM部位相比更高比例的中央记忆细胞，这表明颅骨BM内有一个独特的T细胞环境。为了进一步研究BM中的T细胞表型，我们对来自小鼠颅骨和胸骨BM的T细胞进行了10x单细胞RNA测序（scRNA-seq）分析。基于聚类分析，我们识别出多样的CD4 + T细胞亚群，包括天真T细胞（Sell和Ccr7）、活化T细胞（Cd44）、干扰素刺激基因（ISG）表达细胞（Isg15）、调节性细胞（Foxp3）和分化的辅助细胞（Tbx21、Gata3和Rorc）。值得注意的是，我们观察到以Pdcd1、Cxcr5、Bcl6和Il21等基因的表达为标志的滤泡辅助T细胞（T FH）。图1：BM T FH细胞的鉴定 a、来自颅骨、胸骨BM和硬膜的CD4 + T细胞的scRNA-seq数据的均匀流形近似和投影（UMAP）可视化，基于标记基因表达。ISG +，ISG +细胞；激活，活化T细胞；转变，转变细胞；天真1、2，天真T细胞。b，所示基因的表达密度图。c，颅骨BM中T FH细胞（活体，单一，CD45 + CD3 + CD4 + IL-21–VFP + CXCR5 + ）和IL-21 − CXCR5 −双阴性（DN）细胞（活体，单一，CD45 + CD3 + CD4 + IL-21–VFP− CXCR5−）的标记表达的流式细胞术分析。显示代表性的荧光激活细胞分选（FACS）图（上）和点图（下）。n = 4只小鼠。d，来自WT和IL-21–VFP转基因（Tg）小鼠的颅骨、胸骨和股骨BM的IL-21–VFP + CXCR5 + T FH细胞的流式细胞术数据。显示代表性图（左）和点图（右）。n = 4只小鼠。e，枕骨颅顶和胸骨的整体免疫组化（IHC）图像及定量。n = 3只小鼠。数据以均值±标准误（s.e.m）表示。统计分析使用双尾配对的学生t检验和具有Dunnett或Tukey多重比较检验的单向方差分析（ANOVA）。精确P值已显示。e中的图表由BioRender创建；Kipnis，J. https://biorender.com/icon/mouse-skull-dorsal（颅骨），https://biorender.com/icon/sternum-lateral（胸骨）（2026）。对于e，比例尺，2毫米（左上），500微米（左下）和100微米（右）。源数据为了在蛋白水平验证这些发现，我们对IL-21–VFP（生动的Verdé荧光蛋白）小鼠的BM进行了流式细胞术分析，并确认IL-21 + CXCR5 + T FH细胞作为一个独特的亚群。我们确认CD4 + T细胞是BM中IL-21的主要来源，绝大多数T FH细胞处于效应阶段，其中一些处于中央记忆阶段。