数据可用性 支持本研究发现的所有相关数据均可在本文及其附加信息文件中获得。高通量筛选数据可在Figshare上获得 ( https://doi.org/10.6084/m9.figshare.32358084 ) 。其他数据集可在线获取 ( https://www.wanglab-thu.org.cn/knit ) 。本文提供的源数据。参考文献: Wang, J. Y. & Doudna, J. A. CRISPR技术：十年的基因组编辑才刚开始。Science 379 , eadd8643 (2023)。Zhang, J. et al. 非病毒，特异性靶向CAR-T细胞在B-NHL中实现高安全性和有效性。Nature 609 , 369–374 (2022)。Anzalone, A. V. et al. 使用双重原始编辑对大型DNA序列进行可编程删除、替换、整合和倒排。Nat. Biotechnol. 40 , 731–740 (2022)。Yarnall, M. T. N. et al. 使用CRISPR引导的整合酶在没有双链DNA切割的情况下实现大序列的拖放基因组插入。Nat. Biotechnol. 41 , 500–512 (2023)。Pandey, S. et al. 通过不断进化的重组酶和原始编辑，实现大型基因在哺乳动物细胞中的有效位点特异性整合。Nat. Biomed. Eng. 9 , 22–39 (2025)。Sun, C. et al. 使用PrimeRoot编辑器在植物基因组中精确整合大型DNA序列。Nat. Biotechnol. 42 , 316–327 (2024)。Sharma, R. et al. 作为蛋白质替代疗法平台的白蛋白位点体内基因组编辑。Blood 126 , 1777–1784 (2015)。Roth, T. L. et al. 使用非病毒基因组靶向技术重编程人类T细胞功能和特异性。Nature 559 , 405–409 (2018)。Carter, A., Brackley, S. M., Gao, J. & Mann, J. P. 溶酶体酸脂酶缺乏症的全球流行程度和遗传谱系：一种模仿NAFLD的罕见疾病。J. Hepatol. 70 , 142–150 (2019)。Kumrah, R. et al. 严重联合免疫缺陷症的遗传学。Genes Dis. 7 , 52–61 (2020)。Jinek, M. et al. 一种在适应性细菌免疫中的可编程双RNA引导DNA内切酶。Science 337 , 816–821 (2012)。Mali, P. et al. 通过Cas9进行的人类基因组工程。Science 339 , 823–826 (2013)。Cong, L. et al. 使用CRISPR/Cas系统的多重基因组工程。Science 339 , 819–823 (2013)。Jinek, M. et al. 在人类细胞中进行RNA编程的基因组编辑。eLife 2 , e00471 (2013)。Kosicki, M., Tomberg, K. & Bradley, A. CRISPR–Cas9诱导的双链断裂修复导致大删除和复杂重排。Nat. Biotechnol. 36 , 765–771 (2018)。Tsuchida, C. A. et al. 在临床CRISPR–Cas9工程化T细胞中减轻染色体损失。Cell 186 , 4567–4582 (2023)。Porter, D. L., Levine, B. L., Kalos, M., Bagg, A. & June, C. H. 嵌合抗原受体修饰的T细胞在慢性淋巴细胞白血病中的应用。N. Engl. J. Med. 365 , 725–733 (2011)。Oh, S. A. et al. 使用质粒供体DNA进行高效非病毒CRISPR/Cas9介导的人类T细胞基因编辑。J. Exp. Med. 219 , e20211530 (2022)。Roth, T. L. et al. 用于靶向基因整合到人类T细胞和T细胞选择的非病毒内因子嵌入。Nat. Biomed. Eng. 9 , 1309–1319 (2025)。Eyquem, J. et al. 用CRISPR/Cas9将CAR靶向TRAC位点增强肿瘤排斥。Nature 543 , 113–117 (2017)。Ozdemirli, M. et al. 在cilta-cel CAR T细胞治疗后发生的惰性CD4+ CAR T细胞淋巴瘤。N. Engl. J. Med. 390 , 2074–2082 (2024)。Harrison, S. J. et al. ciltacabtagene autoleucel治疗复发难治性多发性骨髓瘤后的CAR+ T细胞淋巴瘤。Blood 142 , 6939–6939 (2023)。Perica, K. et al. 嵌合抗原受体整合在TP53中的CD4+ T细胞淋巴瘤。N. Engl. J. Med. 392 , 577–583 (2025)。Rees, H. A., Yeh, W. H. & Liu, D. R. 开发能够在没有双链断裂的情况下介导HDR的hRad51–Cas9裂解酶融合体。Nat. Commun. 10 , 2212 (2019)。Komor, A. C., Kim, Y. B., Packer, M. S., Zuris, J. A. & Liu, D. R. 在基因组DNA中可编程编辑目标碱基而无需双链DNA切割。Nature 533 , 420–424 (2016)。