主要 在美国食品药品监督管理局（FDA）批准的十几款ADC在临床中取得了成功。然而，它们对细胞表面高、均匀抗原表达和有效内化的依赖限制了其疗效。此外，肿瘤异质性、补偿信号和抗原丧失促进了耐药性，这使得许多患者不适合或对传统ADC产生耐药性。需要无需均匀高抗原表达的策略来增强ADC对肿瘤的输送，以应对异质性和耐治疗肿瘤。为克服ADC单一抗原靶向的限制，研究者探索了抗体组合和双特异性抗体。靶向不同抗原的抗体组合可以提高治疗效果，并依赖于抗体的独立生物分布，这在异质性肿瘤中可能不是最佳选择。随着抗体组合和多特异性抗体格式的进展，可以开发互补的模块化策略，以促进体内灵活的多靶标结合。生物正交点击化学使得在体内快速和选择性地连接两个组分成为可能。反向电子需求Diels–Alder环加成反应在转环辛烯（TCO）和四氮唑之间被探索，在这种方法中，抗体–TCO是在非靶向小分子四氮唑的全身注射之前给予的。我们在这里介绍了一种名为抗体–ADC点击的模块化策略，它使用抗体–TCO和ADC–四氮唑作为靶向和反应组分。这种方法促进体内形成针对同一靶标的不同域或不同肿瘤靶标的功能性抗体–ADC构建体，而无需大量抗体再工程。为了展示抗体–ADC点击方法的潜力，我们选择了人表皮生长因子受体2（HER2）和表皮生长因子受体1（EGFR）作为抗原。HER2和EGFR是临床验证的靶标，在多种肿瘤类型中表达和/或共同表达，并且已被ADC或抗体独立靶向。EGFR是原发或获得性肿瘤耐药的关键驱动因素，并与预后不良相关。此外，EGFR可以将HER2引导至EGFR–HER2异二聚体而非HER2同二聚体，从而减少HER2靶向的ADC内化和疗效。在HER2表达低或空间变异的肿瘤中，共同表达的靶标如EGFR可以作为共同靶标，以通过体内生物正交组装增强HER2靶向ADC的肿瘤摄取和内化。在本研究中，我们开发了一种抗体–ADC点击策略，利用生物正交化学实现单一受体或多个共同表达受体的模块化结合。我们用互补的点击基团功能化临床批准的抗体和ADC，以促进在随后的全身分布之后迅速的体内连接。我们使用HER2和EGFR作为靶标，展示了抗体–ADC点击的可行性和治疗潜力。该策略使得HER2靶向的ADC——早期二氟氨基糖苷（T-DXd）和美托珠单抗（T-DM1）能够靶向EGFR高或EGFR低的癌细胞，覆盖了HER2表达的整个范围。抗体和ADC之间的生物正交连接反应受点击化学的控制，而抗体–ADC的靶向结合和运输影响摄取、内化和疗效。这种方法的模块化特性可能有助于将其应用于不同的受体和抗体–ADC组合，包括那些目前批准的ADC治疗受益不足的肿瘤。抗体–ADC点击的优化 抗体基础治疗的疗效受肿瘤中靶抗原水平和空间分布的影响。我们调整了HER2和EGFR的肿瘤内异质性模型，每个受体在肿瘤的不同区域中富集。为了定量评估这种空间关系，我们使用自动图像对齐和分割分析了生物标本中的HER2和EGFR表达。每个靶标高表达区域的空间重叠最小，如dice相似系数（DSC）值所示，分别为0.12和0.26。DSC值范围从0到1，1表示完全重叠。因此，我们观察到的数值确认了HER2和EGFR在这些肿瘤模型中是空间上不同的。图1：体内通过生物正交化学连接抗体–ADC构建体的抗体点击平台。a，来自同一肿瘤切片的EGFR和HER2免疫组化图像（顶部）和相应的分割掩模（底部）。